Plasmide CRISPR d'Activation (h) Importin-7: sc-403562-ACT

IPO7 code l’importine‑7, un récepteur de transport nucléaire de la famille des caryophérines‑β qui assure, de manière dépendante de RanGTP, l’importation de protéines cargos à travers le complexe du pore nucléaire. L’importine‑7 favorise la localisation nucléaire de nombreux facteurs, notamment des protéines ribosomiques et des protéines régulatrices impliquées dans le contrôle transcriptionnel, l’organisation de la chromatine et la progression du cycle cellulaire, reliant ainsi le trafic nucléocytoplasmique à la protéostase et aux signaux de croissance. Par son rôle dans l’import nucléaire, IPO7 influence la biogenèse des ribosomes et les programmes de réponse au stress, souvent modifiés dans les états prolifératifs. Un transport nucléaire déréglé et une expression altérée d’IPO7 ont été associés à des voies oncogéniques et à des phénotypes de stabilité génomique, faisant d’IPO7 un nœud pertinent pour les études mécanistiques du trafic nucléaire dans les cellules humaines.

Importin-7 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de IPO7 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Importin-7 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus IPO7 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription IPO7, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Importin-7. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus IPO7 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Importin-7 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Importin-7 dans les cellules tumorales présentant une expression de IPO7 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.