IGFBP6 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-421067

Panoramica

Igfbp6 codifica la proteina 6 legante l’IGF (insulin-like growth factor binding protein 6, IGFBP6), un regolatore secreto della segnalazione degli insulin-like growth factor con elevata affinità per IGF-II, che modula la biodisponibilità del ligando e l’attivazione recettoriale. Sequestrando IGF-II e influenzandone la distribuzione nello spazio extracellulare, IGFBP6 può modellare l’output delle vie PI3K–AKT e MAPK, incidendo così su proliferazione, differenziamento, sopravvivenza e adattamento metabolico. Nei tessuti murini, l’espressione di Igfbp6 contribuisce ai programmi di sviluppo e di omeostasi tissutale, e l’alterazione dell’attività di IGFBP6 è stata studiata in contesti in cui è implicata la disregolazione dell’asse IGF, inclusi la biologia del cancro e fenotipi cardiometabolici. La sua localizzazione extracellulare la rende inoltre rilevante per studi sulla comunicazione paracrina e sul controllo microambientale della segnalazione dei fattori di crescita.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO IGFBP6 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Igfbp6 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Igfbp6 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Igfbp6 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina IGFBP6.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Igfbp6 per lo studio della segnalazione di IGFBP6, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Igfbp6 critici per la funzione di IGFBP6
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Igfbp6 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal IGFBP6 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal IGFBP6 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Igfbp6. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal IGFBP6 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR IGFBP6 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Igfbp6 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Igfbp6 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.