IGFBP5 Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (h): sc-400945-LAC

IGFBP5 (proteína 5 ligadora do fator de crescimento semelhante à insulina) é um regulador secretado e associado à matriz extracelular da sinalização de IGF, que modula a biodisponibilidade e a interação com receptores de IGF-I e IGF-II. Ao moldar o output das vias PI3K–AKT e MAPK/ERK ativadas por IGF1R, a IGFBP5 influencia a proliferação, a sobrevivência, a migração e a diferenciação celular, além de apresentar efeitos adicionais independentes de IGF sobre a adesão celular e a remodelação da matriz. Em tecidos humanos, a IGFBP5 está ligada à biologia de células mesenquimais e fibroblastos, a programas osteogênicos e a estados transcricionais associados ao reparo de feridas, frequentemente em interseção com a sinalização de TGF-β/SMAD e a organização da MEC. A expressão desregulada de IGFBP5 tem sido relatada em diversos microambientes fibróticos e associados a tumores, tornando-a um nó útil para estudar a responsividade a fatores de crescimento dependente do contexto e a remodelação do estroma.

As Partículas de Ativação Lentivirais IGFBP5 (h) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de IGFBP5 numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais IGFBP5 (h) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição IGFBP5, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de IGFBP5. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo IGFBP5 e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.