Plásmido CRISPR de Activación (h) IGFBP5: sc-400945-ACT

IGFBP5 (proteína 5 de unión al factor de crecimiento similar a la insulina) es una proteína secretada de unión a IGF que modula la biodisponibilidad y la señalización de IGF1/IGF2 a través del eje IGF, influyendo en la actividad de las vías PI3K–AKT y MAPK. Al regular la respuesta a factores de crecimiento y las interacciones con la matriz extracelular, IGFBP5 contribuye al control de la proliferación, supervivencia, diferenciación y migración celulares, así como a la remodelación tisular. La expresión alterada de IGFBP5 se ha relacionado con cambios en programas asociados a la fibrosis, en la biología del estroma y en la dinámica del microambiente tumoral, lo que la convierte en un nodo útil para estudiar la regulación del crecimiento dependiente del contexto. Como proteína humana con funciones tanto dependientes como independientes de IGF, IGFBP5 se investiga con frecuencia en vías que regulan la senescencia celular y las respuestas del desarrollo o a lesiones.

IGFBP5 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de IGFBP5 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

IGFBP5 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus IGFBP5 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional IGFBP5, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de IGFBP5. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo IGFBP5 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de IGFBP5 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía IGFBP5 en células tumorales con expresión de IGFBP5 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.