Particules Lentivirales d'Activation (h) IGFBP3: sc-400682-LAC

IGFBP3 (protéine 3 de liaison aux facteurs de croissance de type insuline, *insulin-like growth factor binding protein 3*) est une protéine régulatrice sécrétée qui se lie à l’IGF‑I et à l’IGF‑II avec une forte affinité afin de moduler la biodisponibilité des IGF, leur interaction avec les récepteurs et l’activation en aval des voies de signalisation PI3K–AKT et MAPK. Au-delà de la séquestration des IGF, IGFBP3 participe au contrôle du cycle cellulaire, à l’apoptose, à la sénescence et aux réponses au stress via des interactions dépendantes du contexte avec des composants de la matrice extracellulaire ainsi qu’avec des partenaires de surface cellulaire ou nucléaires. Son expression est régulée de manière dynamique par des signaux hormonaux et inflammatoires et elle est fréquemment altérée dans le cadre de la biologie des cancers, des dérégulations métaboliques et du remodelage tissulaire. Ces propriétés font d’IGFBP3 un nœud utile pour disséquer la signalisation des facteurs de croissance, le contrôle de la prolifération et les phénotypes dépendants du microenvironnement dans les cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales IGFBP3 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de IGFBP3 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales IGFBP3 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription IGFBP3, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de IGFBP3. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif IGFBP3 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.