IGFBP3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-421064
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- IGFBP3 Das CRISPR/Cas9-Knockout (KO)-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, von denen jedes für die Cas9-Nuklease und eine zielspezifische 20-nt-Guide-RNA (gRNA) kodiert, die für maximale Knockout-Effizienz unter Verwendung von Sequenzen aus der GeCKO v2-Bibliothek entwickelt wurde
- gRNA-Sequenzen lenken Cas9 so, dass es ortsspezifische Doppelstrangbrüche (DSBs) im IGFBP3-Genomlokus induziert, was zu einem Gen-Knockout durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ) führt
- Die Puromycin-Resistenz- und RFP-Gene werden von LoxP-Stellen flankiert, was die Entfernung der Selektionsmarker mittels Cre-Rekombinase (Cre-Vektor: sc-418923) nach der Etablierung stabiler Knockout-Zelllinien ermöglicht
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: IGFBP3: sc-365936
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
IGFBP3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) | sc-421064 | 20 µg | $397.00 |
Übersicht
Igfbp3 kodiert das insulinähnliche Wachstumsfaktor-bindende Protein 3 (IGFBP3), einen sezernierten Regulator, der an IGF‑I und IGF‑II bindet und so deren Bioverfügbarkeit, Rezeptorbindung und nachgeschaltete Signalübertragung über die IGF-Achse moduliert. Indem IGFBP3 die IGF-getriebene Aktivität der PI3K–AKT- sowie der MAPK/ERK-Signalwege formt, beeinflusst es Zellwachstum, Überleben, Differenzierung und Gewebeumbau in mehreren Organen der Maus. IGFBP3 kann zudem IGF-abhängige und IGF-unabhängige Effekte auf Apoptose und Stressantworten ausüben, etwa durch Interaktionen mit Bestandteilen der extrazellulären Matrix und Partnern an der Zelloberfläche. Eine fehlregulierte Igfbp3-Expression bzw. ein gestörtes IGF/IGFBP-Gleichgewicht wird häufig im Zusammenhang mit abnormaler Wachstumskontrolle, metabolischer Regulation, Entzündung und onkogenen Signalnetzwerken untersucht.
Das IGFBP3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Igfbp3-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Igfbp3-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.
Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Igfbp3 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die IGFBP3-Proteinexpression aufheben.
Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Igfbp3-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der IGFBP3-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.
Hauptmerkmale
- sgRNAs, die auf Igfbp3-Exone abzielen, die für die IGFBP3-Funktion entscheidend sind
Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
Pool von Plasmiden, die auf mehrere Igfbp3-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion
Designvarianten
CRISPRs +/- HDRs
- gRNAs, die vom IGFBP3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom IGFBP3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Igfbp3-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das IGFBP3 HDR-Plasmid (m) und IGFBP3 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Igfbp3-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Igfbp3-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.