Plásmido CRISPR de Activación (h) IGFBP3: sc-400682-ACT

IGFBP3 codifica la proteína 3 de unión al factor de crecimiento similar a la insulina (IGFBP3), un regulador secretado que se une a IGF‑I e IGF‑II para modular su biodisponibilidad y la señalización a través del eje IGF. Al amortiguar la interacción con los receptores de IGF, IGFBP3 influye en la actividad de las vías PI3K–AKT y MAPK, dando forma a la proliferación, supervivencia y diferenciación celulares, así como a las respuestas metabólicas. IGFBP3 también participa en procesos independientes de IGF, incluida la modulación de la apoptosis y de las respuestas al estrés mediante interacciones con socios de la superficie celular y nucleares. Se han descrito alteraciones en la expresión de IGFBP3 en contextos de investigación sobre cáncer y enfermedades metabólicas, lo que la convierte en un nodo útil para estudiar la dinámica de la señalización de factores de crecimiento y la regulación por el microambiente.

IGFBP3 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de IGFBP3 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

IGFBP3 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus IGFBP3 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional IGFBP3, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de IGFBP3. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo IGFBP3 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de IGFBP3 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía IGFBP3 en células tumorales con expresión de IGFBP3 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.