Plásmido Doble Nickase (h) IGFBP1: sc-400915-NIC

IGFBP1 codifica la proteína 1 de unión al factor de crecimiento similar a la insulina (IGFBP1), un regulador secretado que se une a IGF-I e IGF-II para modular su biodisponibilidad, su interacción con receptores y la señalización downstream a través de las vías PI3K–AKT y MAPK. La expresión de IGFBP1 está fuertemente influida por señales metabólicas y hormonales, como la insulina, los glucocorticoides y el estado nutricional, lo que la vincula con la homeostasis hepática de la glucosa y el balance energético sistémico. Al amortiguar la actividad de los IGF, IGFBP1 puede moldear programas de proliferación, supervivencia y diferenciación celular en contextos endocrinos y paracrinos. Se han asociado niveles alterados de IGFBP1 con desregulación metabólica y con cambios en la señalización del eje IGF observados en diversos estados fisiopatológicos, lo que respalda su utilidad como nodo mecanístico en estudios de señalización por factores de crecimiento y metabolismo.

IGFBP1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus IGFBP1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de IGFBP1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de IGFBP1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con IGFBP1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.