IFN-α/βRβ Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-421048

Visão geral

Ifnar2 codifica, no camundongo, a subunidade do receptor de interferon-α/β IFN-α/βRβ (IFNAR2), um componente central do complexo receptor de interferon tipo I que conecta a ligação extracelular de IFN-α/β à sinalização intracelular via JAK–STAT. Após o engajamento do receptor, o IFNAR2 coopera com o IFNAR1 para ativar TYK2 e JAK1, promovendo a fosforilação de STAT1/STAT2 e a formação do ISGF3, o que induz genes estimulados por interferon que regulam a defesa antiviral, a apresentação de antígenos e a programação de células imunes inatas. Essa via molda os níveis basais de inflamação e a comunicação cruzada com as vias de sinalização NF-κB e MAPK, influenciando redes de citocinas e a homeostase imune. A desregulação da sinalização dependente de IFNAR2 tem sido implicada em patologias mediadas pelo sistema imune e em alterações da suscetibilidade a infecções e inflamação, tornando-a um alvo relevante para estudos mecanísticos em imunologia e biologia do hospedeiro–patógeno.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO IFN-α/βRβ (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Ifnar2 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Ifnar2, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Ifnar2 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína IFN-α/βRβ.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Ifnar2 para a investigação da sinalização de IFN-α/βRβ, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Ifnar2 críticos para a função IFN-α/βRβ
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Ifnar2 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo IFN-α/βRβ Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo IFN-α/βRβ Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Ifnar2. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo IFN-α/βRβ Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR IFN-α/βRβ (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Ifnar2 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Ifnar2 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.