IFITM5 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-428653

Übersicht

Ifitm5 kodiert das interferoninduzierte Transmembranprotein 5 (IFITM5), ein kleines membranassoziiertes Protein mit stark eingeschränkter Expression in Zellen der Osteoblastenlinie und einer Schlüsselrolle bei der Mineralisierung des Skeletts. IFITM5 trägt zur Differenzierung von Osteoblasten und zur Ablagerung der extrazellulären Matrix bei und beeinflusst dabei Prozesse wie die Organisation von Kollagen und die Bildung von Hydroxylapatit während der Knochenentwicklung und des Umbaus. Genetische Veränderungen von IFITM5 sind mit abnormalen Eigenschaften der Knochenmatrix verknüpft und wurden mit Phänotypen der Osteogenesis imperfecta in Verbindung gebracht, was IFITM5 für Studien zur Knochenfragilität und zur beeinträchtigten Mineralakkumulation relevant macht. In Mausmodellen bietet Ifitm5 einen gut handhabbaren Ansatzpunkt, um osteoblasten-intrinsische Signalwege zu untersuchen, die die Knochenqualität sowie die Reaktionen auf entwicklungsbedingte und entzündliche Reize steuern.

Das IFITM5 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Ifitm5-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Ifitm5-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Ifitm5 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die IFITM5-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Ifitm5-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der IFITM5-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Ifitm5-Exone abzielen, die für die IFITM5-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Ifitm5-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom IFITM5 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom IFITM5 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Ifitm5-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das IFITM5 HDR-Plasmid (m) und IFITM5 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Ifitm5-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Ifitm5-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.