Plasmide CRISPR d'Activation (h) IFI-35: sc-406072-ACT

L’IFI35 humain code IFI-35, une protéine induite par les interférons qui module la signalisation de l’immunité innée et les programmes de défense antivirale en aval des interférons de type I. IFI-35 est associée à la régulation des réponses transcriptionnelles inflammatoires, notamment des voies convergeant vers l’expression des gènes stimulés par les interférons (ISG) via JAK/STAT, ainsi qu’au dialogue avec la signalisation des récepteurs de reconnaissance des motifs (PRR). Des altérations de l’expression d’IFI35 ont été observées dans des contextes d’inflammation chronique, de réponses aux infections virales et de phénotypes immunitaires associés aux tumeurs, où elles peuvent influencer les réseaux de cytokines et les interactions entre cellules immunitaires. Ainsi, IFI35 est fréquemment étudié comme un nœud reliant les réponses aux interférons à des changements d’état cellulaire tels que l’adaptation au stress et le contrôle de la croissance médié par l’immunité.

IFI-35 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de IFI35 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

IFI-35 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus IFI35 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription IFI35, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de IFI-35. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus IFI35 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de IFI-35 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie IFI-35 dans les cellules tumorales présentant une expression de IFI35 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.