IFI-204 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-421033

Panoramica

Il gene murino *Ifi204* codifica IFI-204, un membro inducibile dagli interferoni della famiglia proteica PYHIN, implicato nella sorveglianza immunitaria innata e nella regolazione dell’espressione dei geni infiammatori. IFI-204 è associata a programmi di rilevazione degli acidi nucleici nel nucleo e nel citosol che convergono sulla segnalazione dell’interferone di tipo I, su risposte trascrizionali collegate a NF-κB e su checkpoint di controllo del ciclo cellulare. Attraverso queste vie, *Ifi204* è stato studiato in contesti di restrizione antivirale, attivazione di macrofagi e cellule dendritiche e modulazione degli stati proliferativi rispetto a quelli senescenti. Un’attività deregolata di IFI-204 è quindi rilevante in modelli sperimentali di infiammazione cronica, fenotipi simili all’autoimmunità, patologia guidata dall’infezione e interazioni tra tumore e sistema immunitario, senza implicare esiti clinici.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO IFI-204 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Ifi204 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Ifi204 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Ifi204 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina IFI-204.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Ifi204 per lo studio della segnalazione di IFI-204, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Ifi204 critici per la funzione di IFI-204
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Ifi204 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal IFI-204 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal IFI-204 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Ifi204. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal IFI-204 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR IFI-204 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Ifi204 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Ifi204 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.