IER2 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-407175

Descripción general

Immediate early response 2 (IER2) es un gen de inducción rápida, sensible a estímulos, que integra señales extracelulares procedentes de factores de crecimiento, señales de estrés y estímulos mitogénicos en programas transcripcionales de corta duración. La actividad de IER2 se ha relacionado con la regulación de la migración celular, la remodelación del citoesqueleto y el control de la proliferación dependiente del contexto, a través de la señalización inmediata asociada a MAPK/ERK y de cambios posteriores en la expresión génica. Como efector de respuesta inmediata, IER2 contribuye a configurar la reorganización temprana de redes transcripcionales que influye en la dinámica de adhesión y en el comportamiento invasivo en múltiples modelos celulares. Se ha descrito una expresión alterada de IER2 en diversos contextos relevantes para la enfermedad, lo que respalda su utilidad como un nodo mecanístico para estudiar el acoplamiento entre señalización y transcripción en biología del cáncer y procesos relacionados con la inflamación.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO IER2 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen IER2 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del IER2 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de IER2 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína IER2.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en IER2 para la investigación de la señalización de IER2, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de IER2 críticos para la función de IER2
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de IER2 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido IER2 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido IER2 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus IER2. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR IER2 (h) y el plásmido HDR IER2 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología IER2 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana IER2 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.