Plasmide Double Nickase (h) IDO: sc-400495-NIC

L'IDO1 humain code l'indolamine 2,3-dioxygénase (IDO), une enzyme hème‑dépendante qui catalyse la première étape, limitante en vitesse, du catabolisme du tryptophane le long de la voie de la kynurénine. En abaissant les concentrations locales de tryptophane et en générant des métabolites de la kynurénine aux propriétés immunomodulatrices, IDO1 façonne l'homéostasie immunitaire, influence la fonction des lymphocytes T et des cellules présentatrices d'antigène, et s'insère dans les réseaux de signalisation inflammatoire. L'activité d'IDO1 a été associée à des programmes d'échappement immunitaire et de tolérance dans divers contextes pathologiques, notamment en cancérologie, lors d'infections chroniques et dans l'inflammation liée aux maladies auto‑immunes. En tant que point de contrôle métabolique, IDO1 est fréquemment étudiée pour ses rôles dans l'équilibre rédox, les réponses au stress et le dialogue entre le métabolisme et la régulation immunitaire.

IDO Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus IDO1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de IDO1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de IDO1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de IDO1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.