ICSBP Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400774-ACT

O IRF8 humano codifica a proteína ligadora da sequência consenso de interferon (ICSBP), um fator de transcrição restrito ao compartimento hematopoético que coopera com parceiros das famílias IRF e ETS para regular a especificação das linhagens mieloide e de células B, a apresentação de antígenos e programas de genes estimulados por interferon. A ICSBP integra sinais das vias de interferon, TLR e citocinas para moldar respostas imunes inatas e adaptativas, incluindo a ativação de macrófagos e a diferenciação de células dendríticas. A atividade desregulada de IRF8 tem sido associada a alterações no desenvolvimento de células imunes, fenótipos inflamatórios e suscetibilidade a distúrbios imunomediados, sendo frequentemente estudada no contexto da biologia das neoplasias hematológicas. Como regulador nodal de redes transcricionais, o IRF8 oferece um ponto de entrada acessível para dissecar circuitos de regulação gênica que controlam a homeostase imunológica.

ICSBP O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de IRF8 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

ICSBP O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus IRF8 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição IRF8, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de ICSBP. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus IRF8 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de ICSBP no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via ICSBP em células tumorais com expressão de IRF8 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.