Plásmido CRISPR de Activación (h) ICK: sc-406371-ACT

La quinasa de células intestinales (ICK) es una proteína quinasa de serina/treonina que se localiza en los cilios primarios y en el núcleo, donde regula la progresión del ciclo celular, la ciliogénesis y procesos dependientes de microtúbulos. En células humanas, ICK contribuye a redes de señalización vinculadas a la función ciliar y al patrón de desarrollo, incluidas vías que se intersecan con la transducción de señales Hedgehog y con la dinámica del centrosoma. La alteración de la actividad o la expresión de ICK se asocia con fenotipos relacionados con ciliopatías y trastornos del desarrollo, en consonancia con su papel en coordinar la proliferación con la señalización mediada por cilios. ICK también se estudia en contextos en los que cambios en la señalización de quinasas y en el control ciliar influyen en los estados de diferenciación y en la aptitud celular.

ICK El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de ICK sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

ICK El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus ICK en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional ICK, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de ICK. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo ICK y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de ICK en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía ICK en células tumorales con expresión de ICK silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.