I-309 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-422834

概要

Ccl1 は、CCケモカイン I-309 をコードしており、I-309 は分泌性リガンドとして主に CCR8 を介してシグナルを伝達し、炎症組織内における免疫細胞の走化性および局在（ポジショニング）を制御します。マウスでは、CCL1 は活性化T細胞、単球／マクロファージ、その他の白血球によって産生され、白血球トラフィッキング、サイトカインネットワークの協調、ならびに炎症性微小環境の制御に寄与します。この経路は NF-κB に連動した炎症プログラムとも交差し、T細胞の分極やリクルートを左右することで適応免疫応答を形成します。Ccl1/CCR8 シグナルの変化は、アレルギー性炎症、自己免疫様病態、腫瘍関連の免疫浸潤のモデルと関連づけられており、免疫病理の機序研究において重要です。

I-309 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるCcl1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Ccl1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Ccl1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、I-309タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、I-309シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Ccl1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• I-309の機能に不可欠なCcl1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Ccl1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• I-309 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびI-309 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Ccl1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  I-309 HDRプラスミド（m）および I-309 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはCcl1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のCcl1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。