HYPB CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-402789

Übersicht

SETD2, auch als HYPB bekannt, kodiert die wichtigste Histon-Methyltransferase, die für die Trimethylierung von Histon H3 an Lysin 36 (H3K36me3) über aktiv transkribierten Genkörpern verantwortlich ist. Diese Modifikation koordiniert die Transkriptionselongation mit der kotranskriptionellen RNA-Prozessierung, der Chromatinorganisation und der Rekrutierung von DNA-Reparaturmaschinerie und verknüpft damit die SETD2-Aktivität mit der Aufrechterhaltung der Genomstabilität. Das SETD2-abhängige H3K36me3 trägt außerdem dazu bei, die Wahl des Reparaturwegs während der homologen Rekombination festzulegen, und unterstützt eine korrekte Dynamik der Replikationsgabel. Eine veränderte SETD2-Funktion und gestörte H3K36-Methylierungsmuster werden häufig im Kontext onkogener epigenetischer Fehlregulation, Transkriptionsstress und Defekten der DNA-Schadensantwort untersucht.

Das HYPB CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des SETD2-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des SETD2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von SETD2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die HYPB-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von SETD2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der HYPB-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf SETD2-Exone abzielen, die für die HYPB-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere SETD2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom HYPB CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom HYPB CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des SETD2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das HYPB HDR-Plasmid (h) und HYPB HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von SETD2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten SETD2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.