HS3ST3A1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2): sc-406545-KO-2

Übersicht

HS3ST3A1 kodiert die Heparansulfat-Glucosamin-3-O-Sulfotransferase 3A1, ein im Golgi-Apparat lokalisiertes Enzym, das während der Biosynthese von Heparansulfat-Proteoglykanen die 3-O-Sulfatierung von Glucosaminresten katalysiert. Diese Modifikation trägt zur Feinstruktur des Heparansulfats bei und beeinflusst dadurch die Bindung und Präsentation extrazellulärer Liganden; sie prägt somit die Signalübertragung von Wachstumsfaktoren und Morphogenen an der Zelloberfläche und in der extrazellulären Matrix. Über seine Rolle bei der Reifung von Heparansulfat kann HS3ST3A1 Signalwege wie FGF-, VEGF- und chemokinvermittelte Signalübertragung beeinflussen, mit nachgelagerten Effekten auf Zelladhäsion, Migration und Gewebeumbau. Veränderte Expression oder dysregulierte Sulfatierungsmuster des Heparansulfats wurden mit Entwicklungsprozessen und krankheitsrelevanten Phänotypen, einschließlich Tumorprogression und Signalgebung in entzündlichen Mikroumgebungen, in Verbindung gebracht und motivieren mechanistische Studien zur HS3ST3A1-abhängigen Remodellierung von Glykosaminoglykanen.

Das HS3ST3A1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des HS3ST3A1-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des HS3ST3A1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von HS3ST3A1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die HS3ST3A1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von HS3ST3A1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der HS3ST3A1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf HS3ST3A1-Exone abzielen, die für die HS3ST3A1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere HS3ST3A1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom HS3ST3A1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom HS3ST3A1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des HS3ST3A1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das HS3ST3A1 HDR-Plasmid (h) und HS3ST3A1 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von HS3ST3A1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten HS3ST3A1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.