Hrs Plasmide Double Nickase (h): sc-401501-NIC

L’HGS umano codifica il substrato della tirosina chinasi regolato dal fattore di crescita degli epatociti (Hrs), un componente di ESCRT-0 che avvia lo smistamento endosomiale delle proteine di membrana ubiquitinate. Hrs si lega al fosfatidilinositolo 3-fosfato sugli endosomi precoci e coordina il riconoscimento del carico con i complessi ESCRT-I/II/III per promuovere la formazione dei corpi multivescicolari, la degradazione lisosomiale e la down-regolazione della segnalazione recettoriale. Attraverso queste attività, Hrs influenza il controllo, dipendente dall’endocitosi, di vie come EGFR e altre reti di recettori tirosin-chinasici, incidendo sulla durata del segnale e sull’omeostasi cellulare. La deregolazione del traffico endosomiale e del turnover recettoriale associata a un’alterata funzione di HGS/Hrs è stata collegata a contesti rilevanti per la biologia del cancro e per i meccanismi delle malattie neurodegenerative, rendendolo un nodo utile per studiare la proteostasi e l’adattamento della segnalazione.

Hrs Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus HGS nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di HGS. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di HGS. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con HGS interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.