Pas de données CRISPR : l'image illustre la qualité de l'anticorps pour la visualisation des résultats de l'expérience CRISPR.
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Plasmide CRISPR/Cas9 KO HRI (m): sc-420950
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- HRI Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique HRI, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: HRI Antibody (D-12): sc-365239
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO HRI (m) | sc-420950 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
Eif2ak1 code l’inhibiteur régulé par l’hème (HRI), une kinase d’eIF2α sensible au stress qui phosphoryle EIF2S1 afin d’atténuer la traduction globale tout en favorisant la traduction sélective de transcrits d’adaptation au stress. Dans les cellules de souris, HRI relie la disponibilité de l’hème, le stress oxydant et le stress protéotoxique à la réponse intégrée au stress, en coordonnant la protéostasie, l’équilibre rédox et l’homéostasie mitochondriale. Cet axe de signalisation s’interface avec des voies contrôlant la biosynthèse de l’hème et le métabolisme du fer, et module des programmes inflammatoires et apoptotiques en situation de stress cellulaire. La dérégulation du contrôle translationnel dépendant de HRI est pertinente dans des modèles d’anémie et d’hémoglobinopathies, de neurodégénérescence, ainsi que de phénotypes métaboliques ou inflammatoires induits par le stress, lorsque l’homéostasie de la synthèse protéique est perturbée.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO HRI (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Eif2ak1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Eif2ak1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Eif2ak1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine HRI.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Eif2ak1 pour l'étude de la signalisation de HRI, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de Eif2ak1 essentiels à la fonction de HRI
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Eif2ak1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le HRI plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le HRI plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Eif2ak1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le HRI plasmide HDR (m) et le HRI (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Eif2ak1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Eif2ak1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.