Particules Lentivirales d'Activation (h) HPA1: sc-402215-LAC

Le gène humain **HPSE** code l’héparanase (HPA1), une endo‑β‑D‑glucuronidase qui clive les chaînes d’héparane sulfate présentes sur les protéoglycanes de la surface cellulaire et de la matrice extracellulaire, remodelant la membrane basale et libérant des facteurs de croissance liés à la matrice. En modulant la signalisation dépendante de l’héparane sulfate, HPA1 influence l’adhésion et la migration cellulaires, les réponses angiogéniques et le trafic des cellules inflammatoires, avec des effets en aval sur des voies telles que la signalisation FGF/VEGF et les gradients de chimiokines. Une activité d’HPSE dérégulée est associée au renouvellement pathologique de la matrice extracellulaire observé dans l’invasion et la métastase des cancers, l’inflammation chronique, ainsi que les troubles vasculaires et rénaux. Ces caractéristiques font d’HPSE une cible couramment utilisée pour étudier la biologie de la matrice extracellulaire, l’extravasation des cellules immunitaires et les interactions tumeur–stroma.

Les particules d'activation lentivirales HPA1 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de HPSE dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales HPA1 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription HPSE, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de HPA1. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif HPSE ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.