HoxB7 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-404331-ACT

HOXB7 umano codifica il fattore di trascrizione homeobox HoxB7, un regolatore che si lega al DNA e coordina il patterning embrionale e le decisioni sul destino cellulare attraverso programmi trascrizionali dipendenti dal contesto. Nei tessuti adulti e nei sistemi sperimentali, HOXB7 può influenzare la differenziazione epiteliale, la proliferazione e la migrazione modulando reti geniche collegate alla segnalazione dello sviluppo e alle vie dei fattori di crescita, incluse interazioni con gli output di MAPK/ERK e dei recettori tirosin-chinasici. Un’espressione deregolata di HOXB7 è stata associata a fenotipi oncogeni quali maggiore invasività, segnalazione angiogenica alterata e modifiche del controllo del ciclo cellulare in molteplici contesti tumorali, a supporto del suo valore come nodo meccanicistico negli studi di riprogrammazione trascrizionale. In quanto fattore di trascrizione con ampi bersagli a valle, HOXB7 è comunemente studiato per i suoi ruoli nei circuiti regolatori genici dello sviluppo, nella plasticità epitelio–mesenchimale e nella segnalazione correlata al microambiente tumorale.

HoxB7 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di HOXB7 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

HoxB7 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus HOXB7 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione HOXB7, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di HoxB7. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus HOXB7 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da HoxB7 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via HoxB7 nelle cellule tumorali con espressione di HOXB7 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.