HNF-6 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-420893

Descripción general

Onecut1 codifica el factor de transcripción con homeobox HNF-6, un regulador clave de la diferenciación de tejidos derivados del endodermo en el ratón, incluidas las líneas pancreática, hepática y biliar. HNF-6 se une a elementos cis-reguladores para coordinar programas transcripcionales que controlan la morfogénesis epitelial, el desarrollo de conductos y las decisiones de destino celular, y se interrelaciona funcionalmente con las vías de señalización Notch, Wnt/β-catenina y TGF-β durante la organogénesis y la homeostasis tisular. La alteración de la actividad de Onecut1 se ha vinculado con defectos en el desarrollo endocrino pancreático y en el patrón de los conductos, lo que la hace relevante para estudios de disfunción metabólica y fenotipos del desarrollo. En sistemas experimentales, la perturbación de Onecut1/HNF-6 se utiliza para desentrañar redes transcripcionales que acoplan el estado de la cromatina con la especificación de linaje y la maduración de órganos.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO HNF-6 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Onecut1 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Onecut1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Onecut1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína HNF-6.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Onecut1 para la investigación de la señalización de HNF-6, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Onecut1 críticos para la función de HNF-6
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Onecut1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido HNF-6 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido HNF-6 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Onecut1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR HNF-6 (m) y el plásmido HDR HNF-6 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Onecut1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Onecut1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.