Partículas Lentivirales de Activación (m) HNF-4α: sc-420892-LAC

Hnf4a codifica el factor nuclear hepatocitario 4 alfa (HNF-4α), un factor de transcripción de la familia de los receptores nucleares que controla redes génicas necesarias para la diferenciación de los hepatocitos, la polaridad epitelial y la homeostasis metabólica. En tejidos de ratón, HNF-4α coordina vías que regulan la gluconeogénesis, el transporte de lípidos, el metabolismo de los ácidos biliares y la desintoxicación de xenobióticos mediante la regulación directa de programas génicos enriquecidos en hígado y en epitelio intestinal. La alteración de la actividad de HNF-4α interrumpe el control transcripcional de transportadores y enzimas metabólicas, afectando la señalización sensible a la insulina y a los nutrientes, así como las funciones de barrera epitelial. En consecuencia, Hnf4a se estudia ampliamente en modelos de disfunción metabólica, lesión inflamatoria y fisiopatología hepática e intestinal, donde la reprogramación transcripcional impulsa el fenotipo.

Las partículas de activación lentiviral HNF-4α (m) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de Hnf4a en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral HNF-4α (m) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción Hnf4a, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de HNF-4α. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo Hnf4a y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.