Plasmide CRISPR d'Activation (m) HNF-3β: sc-420890-ACT

Foxa2 code le facteur nucléaire hépatocytaire 3 bêta (HNF-3β), un facteur de transcription de la famille forkhead box qui agit comme régulateur pionnier de l’accessibilité de la chromatine au cours de l’embryogenèse précoce et de la spécification de l’endoderme chez la souris. HNF-3β coordonne des programmes transcriptionnels contrôlant la différenciation des épithéliums hépatiques, pancréatiques et pulmonaires, avec des rôles bien établis dans l’homéostasie métabolique, les réseaux de gènes régulant les acides biliaires et la glycémie, ainsi que l’identité épithéliale. Par son interaction avec la signalisation des récepteurs nucléaires et des circuits transcriptionnels du développement, Foxa2 influence l’engagement de lignée, la morphogenèse et le remodelage tissulaire. La dérégulation de l’expression génique associée à Foxa2 a été reliée à des anomalies du développement et à des phénotypes métaboliques altérés, ce qui étaye son utilisation comme nœud mécanistique dans les études de différenciation et de métabolisme.

HNF-3β Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Foxa2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

HNF-3β Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Foxa2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Foxa2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de HNF-3β. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Foxa2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de HNF-3β au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie HNF-3β dans les cellules tumorales présentant une expression de Foxa2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.