HN1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-412133-ACT

HN1（hematological and neurological expressed 1）は、発生過程やストレス条件下において、細胞増殖・分化・細胞周期進行の制御に関与するとされる、小型で保存性の高いタンパク質をコードします。分子パートナーはなお十分に同定されていないものの、HN1の発現は、有糸分裂促進シグナルに関連する転写プログラム、上皮—間葉系の可塑性、代謝適応といったプログラムと関連づけられており、増殖状態の切り替えを協調的に制御する役割が示唆されています。HN1の発現レベルの異常は複数の腫瘍種で報告されており、浸潤性の変化や治療反応性に関するシグネチャーの変動など、攻撃的な細胞表現型と相関するバイオマーカー様指標として評価されることが少なくありません。これらの特性から、HN1はヒト細胞モデルにおけるがん関連シグナル伝達ネットワークや系譜／状態制御の機構研究に有用な標的となります。

HN1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性HN1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

HN1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における HN1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はHN1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性HN1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のHN1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるHN1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびHN1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるHN1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。