Plásmido Doble Nickase (h) HMG-1/HMGB1: sc-400735-NIC

HMGB1 (HMG-1) codifica una proteína de unión al ADN asociada a la cromatina, altamente conservada, que curva el ADN y organiza complejos nucleoproteicos, influyendo en la transcripción, la replicación, la recombinación y la reparación del ADN. En el núcleo, HMGB1 participa en vías de estabilidad genómica, incluida la reparación por escisión de bases y las respuestas a roturas de doble cadena, mientras que su liberación extracelular puede funcionar como un patrón molecular asociado a daño (DAMP) que modula la señalización inmunitaria innata. A través de interacciones con receptores como RAGE y los TLR, HMGB1 vincula el estrés celular con programas inflamatorios que moldean los microambientes tumorales y las respuestas tisulares a la lesión. La actividad y la localización desreguladas de HMGB1 se han asociado con la biología del cáncer, la autoinmunidad y la patología inflamatoria, lo que respalda su uso como nodo mecanístico en estudios de dinámica de la cromatina e inmunometabolismo.

HMG-1/HMGB1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus HMGB1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de HMGB1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de HMGB1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con HMGB1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.