Plasmide CRISPR d'Activation (h) HLA-DRα: sc-401010-ACT

HLA-DRA code la chaîne HLA‑DRα, un composant essentiel des hétérodimères du CMH de classe II qui présentent aux lymphocytes T CD4+ des antigènes peptidiques exogènes et coordonnent l’activation de l’immunité adaptative. HLA‑DRα participe aux voies de traitement et de présentation des antigènes, notamment au trafic dépendant de la chaîne invariante à travers les compartiments endosomaux et au chargement des peptides régulé par HLA‑DM, influençant la sélection des lymphocytes T et les réponses immunitaires périphériques. Les variations d’expression ou de régulation du CMH de classe II sont étroitement liées à la dysrégulation immunitaire et aux pathologies inflammatoires, avec une forte pertinence en auto-immunité et en immunobiologie de la transplantation. Une expression modifiée de HLA‑DR est également largement utilisée comme marqueur des états d’activation des cellules myéloïdes et des lymphocytes B, alimentant les études sur la différenciation des cellules immunitaires et les réponses à la signalisation cytokinaire.

HLA-DRα Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de HLA-DRA sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

HLA-DRα Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus HLA-DRA dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription HLA-DRA, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de HLA-DRα. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus HLA-DRA natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de HLA-DRα au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie HLA-DRα dans les cellules tumorales présentant une expression de HLA-DRA silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.