HLA-DQB1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-420756

Descripción general

H2-Ab1 codifica la cadena beta del MHC de clase II murino, funcionalmente análoga a la HLA-DQB1 humana, y forma un heterodímero que presenta antígenos peptídicos extracelulares a las células T CD4+. Este eje de presentación de antígenos sustenta la selección tímica, la activación de células T en la periferia y el mantenimiento de la tolerancia inmunitaria mediante el tráfico regulado y la carga de péptidos en la vía endosomal. La señalización dependiente de H2-Ab1 influye en programas de citocinas y en respuestas inmunitarias adaptativas posteriores, lo que la vincula a mecanismos que modelan la inflamación y la autoinmunidad. La expresión desregulada del MHC de clase II o la presentación de péptidos se ha asociado ampliamente con una susceptibilidad alterada a la patología mediada por el sistema inmunitario y con variabilidad en las respuestas inmunitarias específicas de antígeno en modelos murinos de enfermedad.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO HLA-DQB1 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen H2-Ab1 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del H2-Ab1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de H2-Ab1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína HLA-DQB1.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en H2-Ab1 para la investigación de la señalización de HLA-DQB1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de H2-Ab1 críticos para la función de HLA-DQB1
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de H2-Ab1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido HLA-DQB1 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido HLA-DQB1 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus H2-Ab1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR HLA-DQB1 (m) y el plásmido HDR HLA-DQB1 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología H2-Ab1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana H2-Ab1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.