Plasmide Double Nickase (h) HLA-DMα: sc-404576-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) HLA-DMα correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide HLA-DMα Double Nickase (h) et le plasmide HLA-DMα Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant HLA-DMA. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: HLA-DMα Antibody (NB-B33): sc-134356
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) HLA-DMα | sc-404576-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) HLA-DMα | sc-404576-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
HLA-DMA code la chaîne alpha de HLA-DM, une molécule non classique du CMH (MHC) de classe II qui forme un hétérodimère avec HLA-DMB dans les compartiments endosomaux/lysosomaux tardifs des cellules présentatrices d’antigène. HLA-DM catalyse l’échange de peptides sur les molécules du CMH de classe II en retirant CLIP de HLA-DR/DP/DQ et en stabilisant le chargement de peptides à haute affinité, façonnant ainsi l’immunopeptidome présenté aux lymphocytes T CD4+. Cette activité relie HLA-DMA aux voies de traitement et de présentation de l’antigène, au trafic endosomal et à l’activation de l’immunité adaptative. Les variations génétiques ou les modifications d’expression au sein de la région HLA de classe II, y compris des composants du système HLA-DM, sont associées à une dérégulation immunitaire et à une susceptibilité à des phénotypes de maladies auto-immunes et inflammatoires.
HLA-DMα Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus HLA-DMA dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de HLA-DMA. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de HLA-DMA. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de HLA-DMA.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.