HKDC1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-432046

概要

Hkdc1 は、グルコースのリン酸化および細胞内でのグルコース利用の制御に関与する、ヘキソキナーゼドメイン含有タンパク質 HKDC1 をコードします。HKDC1 は中心炭素代謝と関連しており、解糖系フラックスに寄与するとともに、ミトコンドリア機能や栄養素センシングと協調してエネルギーホメオスタシスを調節します。マウス系では、Hkdc1 活性の変化が、グルコース処理やインスリン応答性経路を含む代謝表現型と関連することが示されており、肝臓をはじめとするエネルギー需要の高い組織における代謝調節異常やストレス応答の研究において重要です。さらに、その発現と炭水化物代謝との機能的な連関は、ヘキソキナーゼ様酵素が栄養利用可能性に対する細胞適応をどのように形成するかを検討する上での手がかりとなります。

HKDC1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるHkdc1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Hkdc1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Hkdc1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、HKDC1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、HKDC1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Hkdc1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• HKDC1の機能に不可欠なHkdc1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Hkdc1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• HKDC1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびHKDC1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Hkdc1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  HKDC1 HDRプラスミド（m）および HKDC1 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはHkdc1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のHkdc1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。