Histone H1X CRISPR Activation Plasmid (h): sc-411232-ACT

H1FX kodiert Histon H1X, eine Linker-Histonvariante, die an nukleosomale DNA bindet und zur höhergeordneten Chromatinkondensation sowie zur Organisation des Genoms beiträgt. Durch die Modulation des Nukleosomenabstands und der Chromatinzugänglichkeit beeinflusst Histon H1X die Transkriptionsregulation, das Timing der DNA-Replikation und DNA-Schadensantworten über Chromatin-Remodeling-Mechanismen. Eine veränderte H1FX-Expression oder ein Ungleichgewicht von Histon-H1-Varianten wurde mit epigenetischer Dysregulation in Verbindung gebracht, die Zellzustandsübergänge, Proliferationsprogramme und die Genomstabilität beeinträchtigen kann. Diese Eigenschaften machen H1FX zu einem nützlichen Ziel für die Untersuchung der Chromatinarchitektur, transkriptioneller Netzwerke und krankheitsrelevanter epigenetischer Mechanismen in menschlichen Zellen.

Histone H1X Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen H1FX-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Histone H1X Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des H1FX-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der H1FX-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Histone H1X-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native H1FX-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Histone H1X-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Histone H1X-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem H1FX-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.