Histone Deacetylase 8 (HDAC8) Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400757-ACT

HDAC8 codifica a histona desacetilase 8, uma desacetilase de lisina dependente de Zn2+ que modula a acessibilidade da cromatina e a transcrição ao remover grupos acetil de substratos histônicos e não histônicos. Por meio da regulação epigenética, HDAC8 influencia processos celulares centrais, incluindo a progressão do ciclo celular, programas de diferenciação e respostas a danos no DNA, interagindo com vias de remodelamento da cromatina e de controle transcricional. A atividade alterada de HDAC8 tem sido associada à expressão gênica desregulada na biologia do câncer e a fenótipos do desenvolvimento e neurobiológicos, tornando-a um nó útil para estudar o controle epigenético específico de contexto. A modulação experimental de HDAC8 ajuda a definir como a dinâmica de desacetilação molda decisões de linhagem e redes transcricionais adaptativas ao estresse.

Histone Deacetylase 8 (HDAC8) O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de HDAC8 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Histone Deacetylase 8 (HDAC8) O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus HDAC8 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição HDAC8, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Histone Deacetylase 8 (HDAC8). Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus HDAC8 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Histone Deacetylase 8 (HDAC8) no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Histone Deacetylase 8 (HDAC8) em células tumorais com expressão de HDAC8 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.