Plasmide Double Nickase (h) Histone Deacetylase 6 (HDAC6): sc-400314-NIC

HDAC6 code l'Histone désacétylase 6, une désacétylase des lysines majoritairement cytoplasmique qui régule la protéostasie et la dynamique du cytosquelette en désacétylant des substrats non histoniques tels que l'α-tubuline, HSP90 et la cortactine. Par ces activités, HDAC6 influence le transport dépendant des microtubules, la formation d'agrésomes, les voies autophagie–lysosome, les réponses au stress et la motilité cellulaire. HDAC6 interagit également avec le contrôle qualité dépendant de l'ubiquitine via son domaine de liaison à l'ubiquitine, reliant l'agrégation des protéines aux mécanismes d'élimination. Une dérégulation de la signalisation d'HDAC6 a été associée à la neurodégénérescence, à l'invasion des cellules cancéreuses et à des phénotypes inflammatoires, ce qui en fait une cible largement étudiée dans les voies contrôlées par l'acétylation.

Histone Deacetylase 6 (HDAC6) Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus HDAC6 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de HDAC6. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de HDAC6. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de HDAC6.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.