Particules Lentivirales d'Activation (m) hippocalcin: sc-420938-LAC

Le gène murin **Hpca** code l’hippocalcine, une protéine liant le Ca2+ de type « EF-hand », enrichie dans les neurones, appartenant à la famille des capteurs neuronaux du calcium, qui couple les transitoires de calcium intracellulaire à des voies de signalisation en aval. L’hippocalcine participe à des processus dépendants de l’activité synaptique, notamment la modulation de l’excitabilité membranaire, l’homéostasie du calcium et le trafic vésiculaire, et elle a été associée à des voies qui façonnent la plasticité synaptique à long terme dans les circuits hippocampiques. Grâce à un comportement de type « commutateur calcium–myristoyl » et à des interactions avec des partenaires de signalisation neuronale, elle peut influencer des réponses régulées par le Ca2+ telles que la signalisation via l’AMPc, la dynamique des récepteurs et des programmes d’expression génique dépendants de l’activité. La dérégulation des voies de signalisation associées à l’hippocalcine a été étudiée dans le contexte des réponses neuronales au stress et de phénotypes liés à la neurodégénérescence, ce qui en fait un point d’entrée moléculaire pertinent pour explorer les mécanismes sous-jacents aux dysfonctionnements cognitifs et synaptiques.

Les particules d'activation lentivirales hippocalcin (m) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de Hpca dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales hippocalcin (m) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription Hpca, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de hippocalcin. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif Hpca ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.