Plasmide CRISPR/Cas9 KO HiNF-P (h): sc-416760

Présentation

HINFP code le facteur de transcription HiNF‑P, un régulateur de l’expression des gènes d’histone H4 contrôlé par le cycle cellulaire, qui contribue à coordonner l’assemblage de la chromatine avec la réplication de l’ADN. HiNF‑P agit au niveau des promoteurs de gènes exprimés en phase S et s’articule avec des programmes de contrôle transcriptionnel et épigénétique qui maintiennent la stabilité du génome pendant la prolifération. La perturbation de l’apport en histones dépendant de HINFP peut dérégler le dépôt des nucléosomes, le timing de réplication et les réponses aux dommages de l’ADN, reliant cette voie à des phénotypes de croissance anormaux étudiés en biologie du cancer et dans d’autres troubles associés à la prolifération. En tant que facteur nucléaire humain, HiNF‑P est couramment étudié dans des modèles de contrôle du cycle cellulaire, de stress réplicatif et d’organisation de la chromatine.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO HiNF-P (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène HINFP dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du HINFP, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert HINFP à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine HiNF-P.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en HINFP pour l'étude de la signalisation de HiNF-P, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de HINFP essentiels à la fonction de HiNF-P
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de HINFP pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le HiNF-P plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le HiNF-P plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus HINFP. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le HiNF-P plasmide HDR (h) et le HiNF-P (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie HINFP pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles HINFP définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.