Hic-5 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-402786

Panoramica

TGFB1I1 codifica Hic-5, una proteina adattatrice con dominio LIM localizzata nelle adesioni focali e nel nucleo, che coordina la segnalazione dipendente dalle integrine con risposte trascrizionali allo stress meccanico. Hic-5 funge da impalcatura per complessi proteici coinvolti nel rimodellamento del citoscheletro di actina, nel turnover delle adesioni e nella segnalazione delle GTPasi della famiglia Rho, influenzando l’espansione (spreading) cellulare, la migrazione e le interazioni con la matrice extracellulare. Interagisce inoltre con programmi responsivi al TGF-β e con vie correlate che contribuiscono a fenotipi fibrotici e simili alla transizione epitelio-mesenchimale (EMT). Un’attività deregolata di Hic-5 è stata associata ad alterazioni del rimodellamento dello stroma e a comportamenti cellulari invasivi in diversi contesti rilevanti per la malattia, supportandone l’impiego come bersaglio di meccanotrasduzione e di co-regolazione trascrizionale in modelli cellulari umani.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Hic-5 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene TGFB1I1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del TGFB1I1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto TGFB1I1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Hic-5.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di TGFB1I1 per lo studio della segnalazione di Hic-5, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni TGFB1I1 critici per la funzione di Hic-5
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di TGFB1I1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Hic-5 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Hic-5 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus TGFB1I1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Hic-5 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Hic-5 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia TGFB1I1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio TGFB1I1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.