Hhip Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-420853

Panoramica

Hhip (hedgehog-interacting protein) del topo codifica un antagonista associato alla membrana della segnalazione Hedgehog, che si lega ai ligandi Hedgehog e limita l’attivazione della via. Modulando la disponibilità dei ligandi, Hhip contribuisce al controllo della patterning dello sviluppo, dell’omeostasi tissutale e delle interazioni epitelio–mesenchimali a valle dei programmi trascrizionali Sonic Hedgehog–GLI. Alterazioni dell’espressione o della regolazione di Hhip sono state collegate a una deregolazione dell’output della via Hedgehog, implicata in malformazioni congenite e in diversi stati fisiopatologici, tra cui crescita aberrante e rimodellamento fibrotico. In quanto freno della via, Hhip è spesso studiato in contesti in cui la segnalazione Hedgehog influenza le decisioni di destino cellulare, la proliferazione e la differenziazione.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Hhip (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Hhip in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Hhip insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Hhip a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Hhip.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Hhip per lo studio della segnalazione di Hhip, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Hhip critici per la funzione di Hhip
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Hhip per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Hhip CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal Hhip CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Hhip. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Hhip Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR Hhip (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Hhip per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Hhip definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.