HEXB CRISPR Activationプラスミド (h): sc-404765-ACT

ヒトのHEXBは、リソソームβ-ヘキソサミニダーゼのβサブユニットをコードしており、HEXAとの機能的ヘテロ二量体、またはホモ二量体を形成して、GM2ガングリオシドおよびその他の糖鎖複合体（グリココンジュゲート）の段階的分解を触媒します。この酵素活性は、リソソーム依存的な高分子のターンオーバーを支えるとともに、エンドソーム―リソソーム輸送、オートファジーとリソソームのクロストーク、脂質異化などに関わるより広範なプロセスにも寄与します。HEXBの機能が破綻すると、スフィンゴ脂質の恒常性やリソソーム内蓄積が乱れ、基質の蓄積によって駆動されるGM2ガングリオシドーシスの各種病型や神経変性に関連する細胞表現型と結び付けられています。リソソーム加水分解酵素の構成要素として、HEXBは神経細胞およびグリアの生物学、脂質代謝、ならびにリソソーム機能障害に対するストレス応答の文脈でしばしば研究されています。

HEXB CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性HEXBの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

HEXB CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における HEXB 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はHEXB転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性HEXBの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のHEXB遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるHEXB依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびHEXB発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるHEXB経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。