HES1 Particelle di Attivazione Lentivirale (m): sc-420832-LAC

HES1 del topo (Hes1) codifica un repressore trascrizionale della famiglia basic helix–loop–helix che agisce come effettore canonico della segnalazione Notch. HES1 modula le decisioni di destino cellulare sopprimendo programmi trascrizionali proneurali e pro-differenziamento, mantenendo così gli stati progenitori e regolando proliferazione, tempi di differenziamento e patterning tissutale. Partecipa a reti di espressione genica oscillatoria e dialoga con vie di segnalazione come Wnt e Hedgehog per determinare l’impegno di linea in molteplici tessuti, inclusi il sistema nervoso e i compartimenti immunitari. Un’attività di HES1 deregolata è stata associata ad alterazioni della dinamica di staminali/progenitori e a difetti dello sviluppo, ed è frequentemente studiata in modelli di programmi trascrizionali oncogeni e di meccanismi di risposta alle terapie, senza implicare alcun beneficio clinico.

Le particelle di attivazione lentivirale HES1 (m) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di Hes1 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale HES1 (m) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione Hes1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di HES1. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo Hes1 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.