Plasmide CRISPR/Cas9 KO hepcidin (h): sc-403222

Présentation

HAMP code l’hepcidine, une hormone peptidique d’origine hépatique qui constitue le régulateur central de l’homéostasie systémique du fer. L’hepcidine se lie à la ferroportine (SLC40A1), exportateur du fer, et en favorise l’internalisation, limitant ainsi l’absorption du fer alimentaire dans l’intestin ainsi que la libération du fer par les macrophages et les hépatocytes. Sa transcription intègre des signaux issus de la voie BMP/SMAD, de la signalisation des cytokines inflammatoires (notamment IL‑6/STAT3), de l’hypoxie/de la demande érythropoïétique, ainsi que de la saturation de la transferrine circulante, afin de maintenir l’équilibre du fer. Une expression dérégulée de HAMP est associée à des phénotypes de surcharge en fer et à une restriction du fer liée à l’anémie, ce qui en fait un nœud clé pour l’étude du métabolisme du fer et des mécanismes de séquestration inflammatoire du fer.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO hepcidin (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène HAMP dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du HAMP, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert HAMP à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine hepcidin.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en HAMP pour l'étude de la signalisation de hepcidin, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de HAMP essentiels à la fonction de hepcidin
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de HAMP pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le hepcidin plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le hepcidin plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus HAMP. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le hepcidin plasmide HDR (h) et le hepcidin (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie HAMP pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles HAMP définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.