hepcidin CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403222-ACT

ヒトのHAMPは、肝臓由来のペプチドホルモンであるヘプシジンをコードしており、全身の鉄恒常性を統括する中枢的な調節因子として機能します。ヘプシジンは鉄輸送体フェロポルチン（SLC40A1）に結合し、その内在化と分解を誘導することで、血漿への鉄放出（鉄のエフラックス）を低下させ、食事由来鉄の吸収およびマクロファージによる鉄リサイクリングを制御します。ヘプシジンの発現は、鉄感知シグナルおよび炎症性シグナルにより制御されており、ヘモジュベリンやHFE/TFR2複合体からのBMP/SMAD経路入力、ならびにIL-6–STAT3を介した急性期応答などが含まれます。ヘプシジン活性の調節異常は、遺伝性ヘモクロマトーシス、炎症性貧血、鉄過剰負荷を伴う貧血などの疾患における鉄分布や造血バランスの変化と関連しており、HAMPは鉄代謝と自然免疫のクロストークを研究するうえで重要な結節点となります。

hepcidin CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性HAMPの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

hepcidin CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における HAMP 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はHAMP転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性hepcidinの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のHAMP遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるhepcidin依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびHAMP発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるhepcidin経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。