Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Plasmide CRISPR/Cas9 KO Hec1 (h): sc-406844
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Hec1 Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique Hec1, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: Hec1 Antibody (C-11): sc-515550
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO Hec1 (h) | sc-406844 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
NDC80 code Hec1, un composant essentiel du kinétochore externe qui forme le complexe NDC80 et assure directement le couplage des microtubules du fuseau aux chromosomes pendant la mitose. Hec1 coordonne la congression et la ségrégation des chromosomes en favorisant des attachements stables « bout-à-bout » (end-on) aux microtubules et en contribuant à la signalisation du point de contrôle d’assemblage du fuseau (SAC), ce qui permet de maintenir l’intégrité du génome. L’altération ou la dérégulation de Hec1 perturbe la progression mitotique, accroît l’instabilité chromosomique et interfère avec les voies qui contrôlent l’aneuploïdie et les points de contrôle du cycle cellulaire. Ces processus sont fréquemment étudiés dans le contexte des troubles prolifératifs et de la biologie des cellules tumorales, où la fonction du kinétochore et la fidélité mitotique sont altérées.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Hec1 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène NDC80 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du NDC80, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert NDC80 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Hec1.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en NDC80 pour l'étude de la signalisation de Hec1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de NDC80 essentiels à la fonction de Hec1
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de NDC80 pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le Hec1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Hec1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus NDC80. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le Hec1 plasmide HDR (h) et le Hec1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie NDC80 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles NDC80 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.