Hec1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-406844

Panoramica

NDC80 codifica Hec1, un componente essenziale del cinetocore esterno che forma il complesso NDC80 e collega direttamente i microtubuli del fuso ai cromosomi durante la mitosi. Hec1 coordina l’allineamento (congressione) e la segregazione dei cromosomi sostenendo attacchi end-on stabili dei microtubuli e contribuendo alla segnalazione del checkpoint di assemblaggio del fuso (SAC), mantenendo così l’integrità del genoma. L’alterazione o la deregolazione di Hec1 perturba la progressione mitotica, aumenta l’instabilità cromosomica e si interseca con le vie che controllano l’aneuploidia e i checkpoint del ciclo cellulare. Questi processi sono spesso analizzati in studi sui disturbi proliferativi e sulla biologia delle cellule tumorali, in cui la funzione del cinetocore e la fedeltà mitotica risultano compromesse.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Hec1 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene NDC80 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del NDC80 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto NDC80 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Hec1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di NDC80 per lo studio della segnalazione di Hec1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni NDC80 critici per la funzione di Hec1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di NDC80 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Hec1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Hec1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus NDC80. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Hec1 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Hec1 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia NDC80 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio NDC80 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.