HDGFRP3 Plasmide di attivazione CRISPR (h2): sc-416344-ACT-2

L’HDGFRP3 umano (hepatoma-derived growth factor-related protein 3) codifica una proteina nucleare associata alla cromatina, implicata nella regolazione della trascrizione e della dinamica della cromatina attraverso interazioni con il DNA e con partner leganti acidi nucleici. HDGFRP3 è collegato a processi quali il controllo del ciclo cellulare, la proliferazione e la differenziazione, ed è spesso studiato nel contesto della regolazione epigenetica e dei programmi di espressione genica nelle cellule trasformate. Un’alterazione dell’espressione di HDGFRP3 è stata riportata in molteplici tipi di cancro, a supporto del suo impiego come readout molecolare in studi di pathway in ambito oncologico, senza implicare un’utilità clinica. L’editing genetico di HDGFRP3 in modelli cellulari umani consente la dissezione meccanicistica di reti di segnalazione dipendenti dalla cromatina, la mappatura dei bersagli trascrizionali a valle mediante RNA-seq e saggi basati su ChIP, nonché screening funzionali per valutare crescita, risposte allo stress e regolazione del genoma.

HDGFRP3 Il plasmide di attivazione CRISPR (h2) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di HDGFRP3 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

HDGFRP3 Il plasmide di attivazione CRISPR (h2) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus HDGFRP3 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione HDGFRP3, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di HDGFRP3. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus HDGFRP3 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da HDGFRP3 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via HDGFRP3 nelle cellule tumorali con espressione di HDGFRP3 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.