HB9 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-402097-LAC

MNX1 codifica il fattore di trascrizione homeobox HB9, un regolatore di legame al DNA specifico per sequenza che controlla programmi di espressione genica dello sviluppo nel midollo spinale ventrale e nella specificazione dei motoneuroni, oltre alla differenziazione della linea pancreatica. HB9 si integra con reti più ampie di homeobox e di differenziazione neuronale per coordinare le decisioni di destino cellulare, i programmi di guida assonale e le cascate trascrizionali associate alla maturazione. Una disregolazione dell’espressione di MNX1 o un’alterazione dell’attività di HB9 è stata associata a difetti del neurosviluppo e a una riprogrammazione trascrizionale oncogenica in alcune neoplasie selezionate, dove può influenzare la proliferazione e l’identità di linea. Questi collegamenti biologici rendono MNX1/HB9 un nodo utile per studiare il controllo trascrizionale della differenziazione, lo sviluppo dei circuiti neurali e la regolazione genica dipendente dal contesto.

Le particelle di attivazione lentivirale HB9 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di MNX1 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale HB9 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione MNX1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di HB9. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo MNX1 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.