HAUSP CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-434244

概要

マウスのUsp7は、HAUSP（ユビキチン特異的プロテアーゼ）をコードしており、p53–MDM2軸を含むゲノム安定性や転写の主要な制御因子からユビキチンを除去することで、タンパク質の安定性とシグナル伝達ダイナミクスを調節する。HAUSPは、ユビキチン–プロテアソーム経路の制御、DNA損傷応答、複製ストレスへの対処、ならびに細胞周期進行やアポトーシスに影響を及ぼすクロマチン関連プロセスに関与する。チェックポイントシグナル伝達や修復に関わる因子の脱ユビキチン化を通じて、Usp7は遺伝毒性ストレスやオンコジーン活性化後の細胞応答の帰結を形作る。USP7/HAUSP活性の破綻は、腫瘍抑制ネットワークの改変、免疫・炎症シグナルのバランス変化、さらに実験モデルにおけるがん関連表現型の広範な変化と関連づけられている。

HAUSP CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるUsp7遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Usp7内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Usp7のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、HAUSPタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、HAUSPシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Usp7欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• HAUSPの機能に不可欠なUsp7エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Usp7ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• HAUSP CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびHAUSP CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Usp7遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  HAUSP HDRプラスミド（m）および HAUSP HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはUsp7ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のUsp7標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。