G_{β 1} CRISPR Activation Plasmid (h): sc-401901-ACT

GNB1 kodiert die humane Gβ1‑Untereinheit, eine zentrale Komponente heterotrimerer G‑Proteine, die aktivierte GPCRs mit nachgeschalteten Effektoren koppelt. Durch die Bildung von Gβγ‑ und Gα‑Komplexen trägt Gβ1 zur Regulation von Second‑Messenger‑Signalwegen wie cAMP/PKA sowie PLCβ‑abhängigen Ca²⁺/PKC‑Signalwegen bei und beeinflusst dadurch Rezeptordesensibilisierung, Modulation von Ionenkanälen und die Aktivierung der MAPK‑Kaskade. Die GNB1‑abhängige Signalübertragung wirkt auf vielfältige zelluläre Prozesse, darunter Neurotransmission, Zellmigration und metabolische Kontrolle. Eine veränderte GNB1‑Aktivität und ein Ungleichgewicht der G‑Protein‑Signalgebung wurden mit neurologischen Phänotypen sowie einer breiteren Dysregulation GPCR‑gesteuerter Signalwege in Verbindung gebracht, was für Studien zu Krankheitsmechanismen relevant ist.

Gβ 1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen GNB1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Gβ 1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des GNB1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der GNB1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Gβ 1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native GNB1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Gβ 1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Gβ 1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem GNB1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.