Plásmido CRISPR de Activación (h) GSTM1: sc-418201-ACT

La glutatión S-transferasa mu 1 (GSTM1) es una enzima citosólica de desintoxicación de fase II que cataliza la conjugación de glutatión a xenobióticos electrófilos y a productos endógenos de la peroxidación lipídica, favoreciendo la homeostasis redox y la defensa celular frente al estrés oxidativo. La actividad de GSTM1 se relaciona con el metabolismo del glutatión, la amortiguación de especies reactivas de oxígeno y las vías de carcinogénesis química al facilitar la eliminación de intermediarios reactivos. Las variantes genéticas y los polimorfismos por deleción en GSTM1 se estudian ampliamente por su impacto en el manejo de xenobióticos y en la susceptibilidad a lesión celular inducida por tóxicos. La expresión alterada de GSTM1 se ha asociado con diferencias en la señalización inflamatoria y en fenotipos de respuesta al estrés relevantes para la biología del cáncer, la enfermedad pulmonar y la investigación en metabolismo de fármacos.

GSTM1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de GSTM1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

GSTM1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus GSTM1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional GSTM1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de GSTM1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo GSTM1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de GSTM1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía GSTM1 en células tumorales con expresión de GSTM1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.