Grim19 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-403264

Descripción general

NDUFA13 (GRIM19) codifica una subunidad accesoria conservada del complejo I mitocondrial que respalda la fosforilación oxidativa y la correcta transferencia de electrones dentro de la cadena respiratoria. Grim19 contribuye al mantenimiento del potencial de membrana mitocondrial y de la bioenergética celular, vinculando el metabolismo mitocondrial con la homeostasis redox y la susceptibilidad a la apoptosis. Más allá de su papel en el ensamblaje y la función del complejo I, se ha descrito que GRIM19 interactúa con programas de transducción de señales como la transcripción dependiente de STAT3, proporcionando una conexión entre el estado mitocondrial y la regulación génica nuclear. La desregulación de NDUFA13/Grim19 se asocia con fenotipos de disfunción mitocondrial y se ha estudiado en contextos en los que la respiración alterada y la señalización de estrés contribuyen a estados celulares relevantes para enfermedades.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Grim19 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen NDUFA13 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del NDUFA13 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de NDUFA13 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Grim19.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en NDUFA13 para la investigación de la señalización de Grim19, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de NDUFA13 críticos para la función de Grim19
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de NDUFA13 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Grim19 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido Grim19 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus NDUFA13. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Grim19 (h) y el plásmido HDR Grim19 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología NDUFA13 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana NDUFA13 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.